內(nèi)切糖苷酶

- 內(nèi)切
糖苷酶從清潔制劑中的糖蛋白 - 高度穩(wěn)定的酶切割完整的聚糖 - 不含甘油，NaCl或其他添加劑，如EDTA。
- 測(cè)試所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

內(nèi)切糖苷酶是用于分析糖蛋白的廣泛使用的酶。這些酶從糖蛋白釋放完整的聚糖，而外切糖苷酶釋放單個(gè)單糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙酰基葡糖胺，甘露糖等）。

PNGase F通常包含在酶組中，因?yàn)槠淝懈钔暾腘-連接聚糖的活性相似，盡管它實(shí)際上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-連接聚糖的殼二糖核心的個(gè)β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之間切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之間切割N-連接的聚糖，留下帶電荷的殘基，其有助于增加去糖基化蛋白質(zhì)的溶解度，降低蛋白質(zhì)聚集體沉淀的可能性。PNGase F切割所有N-連接的聚糖，而Endo H和Endo F酶切除特定類型的N-連接聚糖。

酶的這種分類還包括O-糖苷酶，其從絲氨酸或蘇氨酸氨基酸中除去核心1O-連接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）。O-連接的聚糖通常含有在分支和線性連接中與半乳糖連接的另外的單糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶來(lái)除去額外的糖。

Endo F1 從肽和蛋白質(zhì)中切割出高甘露糖和一些雜合型N-聚糖

qa-bio E-EF01說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品編號(hào) - 酶
E-EF01的量 - 60μLsE 
-EF01-20 - 20μls¹E 
-EF01-200 - 200μls²¹ 
  包括緩沖液
  ² 僅含酶

Endo F1，內(nèi)切糖苷酶F1，內(nèi)切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶F.

Endo F1切割天冬酰胺連接的高甘露糖和一些混合低聚糖。核心巖藻糖基化將活性降低50倍。內(nèi)切糖苷酶F1將水解含有高甘露糖鏈的硫酸鹽。它在寡糖的二乙酰基殼二糖核心中的兩個(gè)N-乙酰葡糖胺殘基之間切割，產(chǎn)生截短的糖分子，其中一個(gè)N-乙酰葡糖胺殘基保留在天冬酰胺上。相反，PNGase F完整地去除寡糖。

附加遠(yuǎn)藤?F產(chǎn)品
內(nèi)切糖苷酶F2釋放雙觸角和高甘露糖聚糖（以40X減小的速率）
內(nèi)切糖苷酶F3將釋放triantennarry和巖藻糖基雙觸角N-聚糖
的遠(yuǎn)藤?F多套件包括每個(gè)遠(yuǎn)藤?F酶和它們的緩沖器中的20個(gè)μLs。

源重組Elizabethkingia miricola（是腦膜膿毒性金黃）在大腸桿菌

EC 3.2.1.96

Endo F1特異性切割所有天冬酰胺連接的高甘露糖和一些混合低聚糖

內(nèi)容
在20mM酶的60微升等分試樣（1 U）的Tris-HCl，pH 7.5中

包含20μL和60μL包裝尺寸：
5x反應(yīng)緩沖液 - 250 mM磷酸鈉，pH 5.5

比活性 > 16U / mg 
活性 > 17U / ml

分子量 32,000道爾頓

建議用法
1.在Eppendorf管中加入高達(dá)200μg的糖蛋白。用去離子水調(diào)節(jié)至38μl終體積。
2.加入10μl5x反應(yīng)緩沖液5.5 
3.加入2.0μlEndoF1。在37℃孵育1小時(shí)。

比活性
定義為在37℃，pH5.5下，在1分鐘內(nèi)催化從1微摩爾變性核糖核酸酶B（RNase B）釋放N-連接寡糖所需的酶量。通過(guò)SDS-PAGE監(jiān)測(cè)切割（切割的RNase B遷移更快）。

儲(chǔ)存酶儲(chǔ)存在4?C。

穩(wěn)定性妥善儲(chǔ)存至少12個(gè)月。幾天暴露于環(huán)境溫度不會(huì)降低活動(dòng)。

純度內(nèi)切糖苷酶F1如下測(cè)試污染蛋白酶; 將10μg變性的BSA在37℃下與2μL酶一起溫育24小時(shí)。經(jīng)處理的BSA的SDS-PAGE分析顯示沒(méi)有降解的跡象。

生產(chǎn)宿主菌株已經(jīng)過(guò)廣泛測(cè)試，并且不產(chǎn)生任何可檢測(cè)的糖苷酶。