Targeting Systems DLAR-4說明書

雙熒光素酶測定試劑測定鯉魚和高斯熒光素酶活性

目錄號(hào)。

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描述

價(jià)格

DLAR-4

1000次化驗(yàn)

Gaussia/Cypridina雙熒光素酶檢測試劑

$850.00

這種雙熒光素酶分析試劑有兩種成分——i）用于測量高斯熒光素酶的高斯熒光素酶分析試劑和用于測量鯉魚熒光素酶活性的VLAR-2

工具包內(nèi)容

1.100倍柯倫他嗪（儲(chǔ)存溫度為-20°C）

2.高斯熒光素酶分析稀釋緩沖液（儲(chǔ)存于4°C）

3.100x Cypridina熒光素底物（在-80°C下儲(chǔ)存）

4.Cypridina底物稀釋緩沖液（在4°C下儲(chǔ)存）

5.VLAR-2緩沖液（塞浦路斯熒光素酶分析緩沖液）（儲(chǔ)存于4°C）

優(yōu)勢

·¨Cypridina熒光素酶和Gaussia熒光素酶在轉(zhuǎn)染細(xì)胞的上清液和裂解液中都具有非常強(qiáng)的信號(hào)。因此，可作為雙重分泌報(bào)告者或雙重細(xì)胞內(nèi)報(bào)告者使用。

·¨天然鯉魚（Vargula）熒光素酶和高斯熒光素酶具有天然分泌信號(hào)，表達(dá)后有效分泌到細(xì)胞培養(yǎng)基中。測定熒光素酶不需要細(xì)胞裂解。

·¨Cypridina熒光素酶比螢火蟲/腎素?zé)晒馑孛噶?0-30倍，具有最高的轉(zhuǎn)換數(shù)和比常用螢火蟲熒光素酶更高的生物發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度，使其成為理想的轉(zhuǎn)錄報(bào)告者（1）。

·¨Gaussia熒光素酶分析系統(tǒng)的穩(wěn)定劑組件在較長時(shí)間內(nèi)提供穩(wěn)定的動(dòng)力學(xué)，為用戶提供高通量分析和手動(dòng)交付分析所需的時(shí)間。

·¨分泌的塞浦路斯熒光素酶蛋白穩(wěn)定，具有*的光產(chǎn)生活性，允許進(jìn)行非常敏感的分析（1,2）。

·¨同時(shí)含有CLuc和分泌型高斯熒光素酶（即轉(zhuǎn)染后的生長培養(yǎng)基或細(xì)胞裂解物）的樣品可在-20°C下長期儲(chǔ)存。

描述：一組經(jīng)過改進(jìn)的超敏感分泌型熒光素酶報(bào)告子已被開發(fā)出來，用于分析同一組轉(zhuǎn)染細(xì)胞中不同的啟動(dòng)子活性。這種方法不僅可以分析同一組細(xì)胞中的三條或多條通路（反應(yīng)），而且還可以在不殺死細(xì)胞的情況下實(shí)時(shí)研究反應(yīng)（因?yàn)檫@三條反應(yīng)器是分泌的）。靶向系統(tǒng)提供了許多不同的細(xì)胞內(nèi)和分泌型雙熒光素酶分析試劑。Cycprida–Gaussia熒光素酶分析系統(tǒng)特別有吸引力，因?yàn)镃ypprida熒光素酶和Gaussia熒光素酶在細(xì)胞內(nèi)和分泌部分都具有強(qiáng)大的活性。當(dāng)使用該試劑進(jìn)行分析時(shí)，它們都具有穩(wěn)定的生物發(fā)光信號(hào)。

塞浦路斯（瓦古拉）熒光素酶：

Cypridina熒光素酶（以前稱為Vargula熒光素酶）來自海洋介形類Vargula Hilgendorfi或Cypridina Noctilucus，是一種分泌型熒光素酶，最大發(fā)射波長為460nm。它的亮度大約是螢火蟲熒光素酶的20-30倍。擁有最高的營業(yè)額。與螢火蟲熒光素酶不同，Cypridina-lcufierase不需要ATP，并催化其*底物Cypridina-luciferin的氧化，如前所述

圖1:Cypridina熒光素酶催化的光化學(xué)反應(yīng)。

Cypridina熒光素不同于腔烯特拉嗪，腔烯特拉嗪是雷尼拉、高斯和Metridia熒光素的底物。由于其*的底物和明亮的分泌型熒光素酶活性，Cypridina熒光素酶在涉及Gaussia、Renilla或Firefly熒光素酶的多重檢測中特別有用。分泌型CLuc是一種非常穩(wěn)定的蛋白質(zhì)。由于這一特性，從上清液中測得的活性反映了在取樣之前累積的蛋白質(zhì)量。塞浦路斯熒光素酶是由細(xì)胞自然分泌的（圖2）。因此，細(xì)胞裂解對于熒光素酶活性的測定是不必要的。

高斯熒光素酶：關(guān)于高斯熒光素酶：

高斯熒光素酶（GLuc）是海洋橈足類高斯熒光素酶（1,2）。這種不需要ATP的熒光素酶在產(chǎn)生光的反應(yīng)中催化底物柯倫他嗪的氧化，與其他發(fā)光報(bào)告基因相比，它具有相當(dāng)大的優(yōu)勢，例如分泌性和更亮的信號(hào)強(qiáng)度，以及生物發(fā)光信號(hào)的穩(wěn)定性（約10%在一小時(shí)內(nèi)衰減）。從轉(zhuǎn)染了表達(dá)GLuc的質(zhì)粒的培養(yǎng)細(xì)胞上清液中測得的發(fā)光與產(chǎn)生的酶量成正比，這反過來又反映了轉(zhuǎn)錄水平。或者，可以使用細(xì)胞裂解物進(jìn)行分析。雖然大部分活性是分泌的，但高斯熒光素酶的高靈敏度也允許從細(xì)胞裂解物中進(jìn)行測量。

使用Gaussia熒光素酶分析試劑（GAR-1或DLAR-4組分1）試劑的天然GLuc生物發(fā)光信號(hào)動(dòng)力學(xué)：使用靶向系統(tǒng)的GAR-1試劑測量細(xì)胞上清液（轉(zhuǎn)染Gaussia熒光素酶表達(dá)載體）中的Gaussia熒光素酶活性
圖2b：光發(fā)射動(dòng)力學(xué)。使用塞浦路斯熒光素酶分析試劑（VLAR-2或DLAR-4組分2）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pCMV-VLuc表達(dá)載體的HEK 293細(xì)胞上清液評(píng)估塞浦路斯熒光素酶生物發(fā)光信號(hào)的穩(wěn)定性
該試劑適用于需要分析大量樣品的高溫超導(dǎo)應(yīng)用。在沒有穩(wěn)定器的情況下，信號(hào)強(qiáng)度最初略高，但衰減速度比有穩(wěn)定器時(shí)快。
注：數(shù)據(jù)是在Turner TD2020光度計(jì)上測量的三次測定的平均值。